Preservação da linhagem germinativa em machos murinos

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Ao longo da vida reprodutiva dos machos adultos, espermatozoides são formados pelas células-tronco espermatogoniais (SSCs, do inglês spermatogonial stem cells) por um processo conhecido como espermatogênese. O cultivo in vitro de SSCs abriu novas possibilidades para a preservação da linhagem germinativa, porém os protocolos requerem a adição de fatores de crescimento, o que encarece a manutenção dessas células por um tempo prolongado, fazendo da criopreservação de SSCs uma alternativa para esse problema. A literatura científica ainda não definiu uma metodologia que seja eficaz no congelamento das SSCs, bem como na seleção de uma população pura, ou seja, sem contaminação por células que possam causar carcinomas. O presente estudo tem por objetivo avaliar metodologias de criopreservação de SSCs de murinos pré-púberes. Para testar esse objetivo, testículos de camundongos da linhagem C57Bl6GFP com 8 a 10 dias serão coletados. Esses testículos serão congelados utilizando dois protocolos distintos de vitrificação. Após a descongelação dos testículos, será realizado uma digestão e isolamento das células testiculares, as quais serão incubadas com anticorpo anti-Thy-1.2 para a purificação das SSCs, por meio da técnica de separação celular ativada por magnetismo (MACS). As células selecionadas serão transplantadas através dos ductos eferentes de camundongos adultos da linhagem C57Bl6, previamente tratados com um quimioterápico. Após 4 a 6 semanas os testículos destes animais serão coletados e será feito uma dissociação dos túbulos seminíferos para verificação da integração e formação de colônias pelas SSCs transplantadas.

Tese de doutorado.-